ELISA試劑盒為捕獲抗體具有高親和力、高特異性、低內(nèi)毒素的單抗，研究者以刺激劑激活細(xì)胞時(shí)，不會(huì)影響活化細(xì)胞分泌細(xì)胞因子。ELISA試劑盒的原理是什么?
　　到目前為止，ELISA法仍在研究當(dāng)中占有著主流地位，普遍應(yīng)用使得實(shí)驗(yàn)更加方便、經(jīng)濟(jì)和準(zhǔn)確， ELISPOT技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)也決定了它的發(fā)展?jié)摿?。LISPOT法來源于ELISA，相比較傳統(tǒng)的ELISA法有所突破，是定量ELISA技術(shù)的延伸和發(fā)展。由于游離的循環(huán)抗體或CK的半哀期不同，使之在體液中不斷的被代謝或與靶器官結(jié)合，傳統(tǒng)的酶聯(lián)吸附法(ELISA法)不能確切的反映體內(nèi)的抗體及CK的水平。
　　ELISA試劑盒的原理包括了可以提了兩款改良型siRNA用于活體轉(zhuǎn)染?？梢栽黾觭iRNA-轉(zhuǎn)運(yùn)試劑復(fù)合體的穩(wěn)定性。而SIRNAPLUS則不需要轉(zhuǎn)運(yùn)試劑，其轉(zhuǎn)運(yùn)載體就整合在siRNA分子上。為了解決這一問題，公司開發(fā)了一個(gè)試劑盒，可以將shRNA插入到基因組的特定位置。這一靶向整合試劑盒采用鋅指核酸酶技術(shù)，將 shRNAELISA試劑盒插入到人類基因組的AAVS1位點(diǎn)。這一技術(shù)將shRNA定位在一個(gè)地方，使影響shRNA表達(dá)水平的一個(gè)重要變量固定下來。
　　ELISA試劑盒普遍用作非放射性同位素的成鍵化驗(yàn)。在這種方法中，通常標(biāo)準(zhǔn)配體是固定的，通過加入溶液相受體或蛋白質(zhì)來使之成鍵。通過加入與受體特異性反應(yīng)的抗體來定量成鍵的受體，而且一開始抗體的量以加入第二種能顯色的抗體測(cè)量。第二種抗體能識(shí)別抗體的末端，在其末端的堿性磷酸酯或過氧化物酶等與酶發(fā)生反應(yīng)，從而使溶液顯色。

酶聯(lián)吸附測(cè)定原理
ELISA遵守以下3個(gè)核心原理：1)抗原或抗體能吸附于固相載體表面，并保持其學(xué)活性;2)抗原或抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其學(xué)和酶學(xué)活性;3)酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，可根據(jù)已知濃度的抗原或抗體的顏色反應(yīng)的深淺繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并依此計(jì)算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。在ELISA中酶起到很關(guān)鍵的作用，常用于ELISA法的酶有辣根過氧化物酶，堿性磷酸酯酶等，其中尤以辣根過氧化物酶為多。酶結(jié)合物是酶與抗體或抗原, 半抗原在交聯(lián)劑作用下聯(lián)結(jié)的產(chǎn)物,它不僅具有抗體抗原特異的反應(yīng)，還能催化酶促反應(yīng)，顯示出生物放大作用。

ELISA試劑盒保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外，一般均選用水浴，可將ELISA試劑盒板置于水浴箱中，ELISA板底應(yīng)貼著水面，使溫度敏捷平衡。為防止蒸騰，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時(shí)可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA試劑盒應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性良好的資料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度，特別是在氣溫較低的時(shí)候更應(yīng)如此。
為什么ELISA反響總是需求一定時(shí)刻的溫育?
ELISA屬固相測(cè)定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生，以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標(biāo)本，其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時(shí)機(jī)，只有貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸，這是一個(gè)逐步平衡的進(jìn)程，因而需經(jīng)擴(kuò)散才能到達(dá)反響的結(jié)尾。在這以后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。
溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃等。
37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的適宜溫度，在建立ELISA方法作反響動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，實(shí)驗(yàn)表明，兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1～2小時(shí)，產(chǎn)品的生成可達(dá)高峰。為加快反響，可進(jìn)步反響的溫度，有些實(shí)驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜選用更高的溫度?？乖贵w反響4℃更為，在放射測(cè)定中多使反響在冰箱中過夜，以構(gòu)成多的沉淀。但因所需時(shí)刻太長(zhǎng)，在ELISA試劑盒中一般不予選用。