產(chǎn)品介紹:
產(chǎn)品名稱:綿羊夏伯特線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱:Chabertia ovina
產(chǎn)品貨號:LZ-P3375
規(guī)格:50T
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光。
有效期:一年
實驗步驟:
一.樣品制備
1.PCR擴增并檢測。根據(jù)不同的引物挑選適合的退火溫度進行PCR擴增。擴增產(chǎn)物用2-2.5%的瓊脂糖膠跑水平電泳檢測,上樣量3-5ul。PCR產(chǎn)物為10ng/nl左右為佳。上海
2.PCR產(chǎn)物與變性buffer混合。在干凈的PCR管底部加入5ul SSCP上樣緩沖液(變性緩沖液,同《分子克隆》中的測序緩沖液),然后在緩沖液中央加入PCR擴增產(chǎn)物。按照經(jīng)驗,擴增效果在瓊脂糖膠上能看出比較亮的帶的樣品加1ul,效果很好加0.5ul,如果不太好就適當增加1.5、2或3不等,同時加大上樣緩沖液的量,比如加3ul的PCR產(chǎn)物,緩沖液加到8ul變性效果更好。
3.PCR產(chǎn)物變性。加好的樣品進行離心,使樣品集中在管底。PCR儀上95℃變性10分鐘,立即取出PCR產(chǎn)物連同架子一同置于冰上靜置5min,以免變性的產(chǎn)物復性。
如何進行 PCR 實驗?
一、準備實驗材料(1)DNA模板:包含你想要復制的DNA區(qū)域。(2)引物:短的單鏈DNA片段,用于指導DNA合成的起始位置。(3)DNA聚合酶:一種酶,用于合成DNA。(4)四種脫氧核苷酸(dNTPs):DNA的構(gòu)建塊。(5)緩沖液:提供適宜的反應(yīng)環(huán)境。(6)鎂離子或其它必需的離子:通常作為DNA聚合酶的輔助因子。 二、設(shè)定反應(yīng)混合物將所有材料混合在微量離心管中。混合物的總體積通常在20-50微升之間。
3. PCR程序(1)將混合物放入PCR機(熱循環(huán)儀)中,并設(shè)定程序。PCR程序通常包括以下階段:綿羊夏伯特線蟲(2)初次變性:加熱至94-98°C,持續(xù)幾分鐘,使DNA雙鏈解開成單鏈。(3)循環(huán)步驟(通常進行30-40次循環(huán)):(4)變性階段:加熱至94-98°C,持續(xù)20-30秒,使DNA雙鏈解開。(5)退火階段:降溫至50-65°C,持續(xù)20-40秒,允許引物與模板DNA結(jié)合。(6)延伸階段:加熱至72°C,持續(xù)1分鐘每1千個堿基,以便DNA聚合酶合成新的DNA鏈。(7)后延伸:在72°C下持續(xù)5-10分鐘,確保所有可用的DNA模板都被復制。(8)保持階段:將溫度降至4-15°C,直到用戶準備取出樣品。
PCR實驗的基本步驟:
DNA聚合酶是實驗室中常用的生物學酶之一,在PCR實驗中具有重要的作用。實驗室常用的DNA聚合酶,包括Taq聚合酶、Pfu聚合酶和Tth聚合酶。
一、探針法熒光定量PCRTaq聚合酶:
Taq聚合酶是由Thermus aquaticus細菌產(chǎn)生的一種DNA聚合酶,在分子生物學研究中得到廣泛應(yīng)用。Taq聚合酶具有熱穩(wěn)定性,可以在高溫條件下保持活性,這是由于其來源于熱液生物,能夠存活和正?;顒佑诟邷丨h(huán)境。這使得Taq聚合酶在聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)中起到關(guān)鍵的作用。Taq聚合酶能夠按照DNA模板合成新的DNA鏈,因此在PCR中用于擴增目標DNA片段。然而,Taq聚合酶缺乏3'-5'外切酶活性,導致其生成的PCR產(chǎn)物末端容易出現(xiàn)額外的腺嘌呤堿基。因此,在某些應(yīng)用中,需要使用具有外切酶活性的聚合酶。
二、Pfu聚合酶:
PCR法Pfu聚合酶是由Pyrococcus furiosus細菌產(chǎn)生的一種DNA聚合酶。與Taq聚合酶相比,Pfu聚合酶具有更高的熱穩(wěn)定性和耐酶性。這使得Pfu聚合酶在高溫PCR反應(yīng)中表現(xiàn)出色,其高度穩(wěn)定的酶活性能夠確保PCR反應(yīng)的可靠性和準確性。此外,Pfu聚合酶還具有3'-5'外切酶活性,可以修復并糾正PCR反應(yīng)中的腺嘌呤堿基誤配,有效防止誤差累積。因此,Pfu聚合酶適用于需要高度準確的PCR擴增和DNA測序。
三、Tth聚合酶:
Tth聚合酶是由Thermus thermophilus HB8細菌產(chǎn)生的一種DNA聚合酶。與Taq聚合酶和Pfu聚合酶不同,Tth聚合酶具有熱活性反轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄酶活性,可以將RNA模板合成相應(yīng)的DNA鏈。因此,Tth聚合酶在逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)中得到廣泛應(yīng)用,用于將RNA轉(zhuǎn)錄成DNA,并通過增加熱活性酶來實現(xiàn)PCR擴增。此外,Tth聚合酶還具有一定的外切酶活性,可用于修復和校正PCR產(chǎn)物的末端。
人胱天蛋白酶12(Casp-12)ELISA
小鼠胞內(nèi)氯離子通道蛋白1(CLIC1)試劑盒 Mouse Chloride inacellular channel protein 1,CLIC1 ELISA kit
胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素(TSLP)PCR檢測試劑盒 , TSLP ELISA Kit
MouseHeatShockFactor1,HSF1PCR檢測試劑盒小鼠熱休克因子1(HSF1)PCR檢測試劑盒
ELISAKitPAF兔子血小板活化因子規(guī)格:48T/96T
Camellprotein-associatedphospholipaseA2,Lp-PL-A2ELISAKit駱駝脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)PCR檢測試劑盒
Anti-CXCL9/MIG/CMK/FITC 熒光素標記γ干擾素誘導單核細胞因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-RSK3/Ribosomal S6 kinase 3/FITC 熒光素標記核糖體蛋白S6激酶家族RSK3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Cathepsin G/CTSG 組織蛋白酶G抗體 規(guī)格 0.1ml
FAST kinase(Fas-activated serine/threonine kinase) Fas活化的絲/蘇酸激酶抗原 0.5mg
Phospho-HP1(Tyr43) 英文名稱: 異染色質(zhì)蛋白10酸化抗體(果蠅) 1ml
Rhesus antibody Rh SLC25A10 線粒體二羧酸載體蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-RSK3/Ribosomal S6 kinase 3/FITC 熒光素標記核糖體蛋白S6激酶家族RSK3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
綿羊夏伯特線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒MIP-5(Human macrophage inflammatory protein 5) ELISA Kit 人巨噬細胞炎性蛋白5Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-GDF-1 生長、分化因子1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Guinea pig IgG/Gold 膠體金標記的小鼠抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.5ml
Tie1(Human tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 1) ELISA kit 人血管生成素受體/含樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪酸激酶1 96T
phospho-c-Raf (Ser259) 英文名稱: 0酸化原癌基因c-Raf抗體 0.1ml
CRK7 英文名稱: 細胞分裂周期2相關(guān)蛋白激酶7抗體 0.2ml
Anti-GDF-1 生長、分化因子1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
甲基檸檬酸合酶(MCS)試劑盒可見分光光度法
780元
產(chǎn)品名:甲基檸檬酸合酶,可見分光光度法,試劑盒
乙酰輔酶A試劑盒紫外分光光度法
780元
產(chǎn)品名:乙酰輔酶A試劑盒,紫外分光光度法,試劑盒
脂肪酸合成酶(FAS)試劑盒紫外分光光度法
780元
產(chǎn)品名:脂肪酸合成酶,紫外分光光度法,試劑盒
線粒體檸檬酸(MCA)含量試劑盒紫外分光光度法
975元
產(chǎn)品名:線粒體檸檬酸,紫外分光光度法,試劑盒
酰基轉(zhuǎn)移酶(AAT)試劑盒可見分光光度法
1300元
產(chǎn)品名:?;D(zhuǎn)移酶,可見分光光度法,試劑盒
可溶性淀粉合成酶(SSS)試劑盒紫外分光光度法
1300元
產(chǎn)品名:可溶性淀粉合成酶,紫外分光光度法,試劑盒
結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)試劑盒紫外分光光度法
1300元
產(chǎn)品名:結(jié)合態(tài)淀粉合成酶,紫外分光光度法,試劑盒
NO含量試劑盒微量法
253.5元
產(chǎn)品名:NO含量,微量法,試劑盒